1.將隨機提供的減壓閥裝在CO2鋼瓶上，接頭處不得有漏氣現象，暫不打開鋼瓶。將減壓閥輸出接頭用膠管與CO2箱背后上方的CO2進氣管街頭相連，用壓緊圈壓緊，以防漏氣。
2.用酒精將CO2箱工作室內擦凈，在箱體后背打開紫外線燈電源開關，1-2h。
3.用加水管連接水和箱體左上側加水口。水套式CO2箱一次操作。
4.接通電源，電源開關置“1”，指示燈亮。
水套式CO2箱行加水操作。打開水，緩慢給睡鄉加水，隨水位逐漸升高，當地水位指示燈滅后，此時再等3-5s，后停止加水，此時水位在低、高之間，水位燈均不亮，設備可投入運行。
將溫度設定值調到需要的溫度（例如37度），加熱指示燈亮（綠）應亮，表示正在加熱。（注：環境溫度出25度，可用空調降低環境溫度）
將CO2控制開關置于“0”。
待溫度達到設定值后，將CO2鋼瓶開啟，（開啟前，減壓閥應盡量擰松，防止減壓閥輸出壓力過高導致橡皮管爆裂！）減壓閥上進氣壓力表指示鋼瓶內CO2壓力，緩慢地順時針擰減壓閥旋鈕。使減壓閥輸出壓力指示為0.05MPa，指針處于刻度線中間。此時用撥盤設定CO2濃度（出廠時調整為5%），開啟CO2控制開關前要關閉空氣流量計和CO2流量計，CO2控制器顯示“1”，此時即有CO2進入內室。隨著濃度升高，CO2控制器顯示出CO2濃度值，到設定值時，設備自動切換到空氣及CO2補氣狀態。此時需調整空氣流量計應指示在760ml/min（出廠時已經調好），CO2流量計浮子應指示在40ml/min（出廠時已經調好）；若浮子偏離上述數值時，可調節流量計旋鈕到760ml/min（空氣）及40ml/min（CO2）準確為止。
當溫度達到設定值，波動±0.5℃以內，CO2濃度也到到要求后，即可進行細胞培養。放入水盤，使濕度符合要求。
在使用本機或長期不用后使用本機，均應按上述要求操作，并且在正式培養前應作箱內污染檢。
5.關機
培養結束后，開箱門取出培養皿，將未培養皿重新放入（注意觀察水盤中的蒸餾水是否需）。若停止培養，則應先將CO2鋼瓶關閉，再將空氣流量計和CO2流量計關閉,CO2進氣開關置“0”。位置，關閉總電源。若長期不使用，應取出水盤，擦干工作室，在CO2進氣開關關閉狀態下，使CO2箱在37℃條件下開機2h，烘干工作室，再切斷總電源。
6.溫度調節辦法
本機出廠時，以37℃為基準調好，如冬天箱內玻璃門上水霧大，無法看清箱內培養物，可在CO2箱內背后調節門溫旋鈕，向左旋動，即溫度升高的方向，直至能看清箱內物品；如夏天，箱內實際溫度設置溫度時，則將調節旋鈕向右旋轉，即溫度降低，直至箱內溫度達到37℃。
7.風機調節方法
使用中，風量的大小不但會影響箱內溫度的均勻度，直至影響控制溫度。若在使用中，風量的過大影響到培養物品，則可在CO2箱后背調節風機轉速旋鈕，直至滿足需要。

注意事項
1.本機應安裝在空氣干凈、無日光直射、無強電磁場及輻射能量，周圍溫差變化比較小的室內。為保證CO2箱控溫精度，建議在15℃-25℃的環境下使用。
2.特別注意鋼瓶開啟前，一定要擰松減壓閥，防止輸氣膠管爆破。
3.當環境溫度與設定溫度差小于（RT+5℃）時，應用空調降低周圍環境溫度，在培養的全過程中，應保持環境溫度沒有明顯的變化，否則因環境溫度的變化，引起CO2箱內控溫不準。
4.使用過程中應經常監視減壓閥輸出壓力及二個流量計的流量，切不可隨意擰動控制箱內的各類閥門。若CO2箱內濃度有偏差，應先找出各相關數值不準的原因，才能略微調整。
5.鋼瓶壓力不足1MPa時應及時換，換鋼瓶時，應先將鋼瓶開關關閉，擰松減壓閥螺軸，再拆下減壓閥重新安裝在新的鋼瓶上。
6.在卡帶CO2箱內門時，應先關閉CO2控制開關，關門后，待CO2濃度顯示屏顯示“0.0”時，再打開CO2控制開關。
7.CO2應有良好的接地裝置，以保證。